植物微生物學多光子顯微技術樣品檢測顯微鏡
多光子激發熒光顯微技術
在多光子激發熒光顯微技術中,熒光發色團是被兩個或更多的比發
射光波長更長的光子所激發的。因為激發只發生在顯微鏡的焦點上,所
以不對準焦點的就吸收的很少,因此有更多的激發光到達聚焦平面。在
原理上,多光子激發熒光顯微技術法有三個主要優點:具有很強的穿透
厚樣品的能力;采用紅外光激發而實現對活細胞光損傷最小化,以及減
少聚焦平面外的光漂白。
多光子顯微技術在改善深嵌于植物組織中的微生物細胞的成像方面
具有很大的應用潛力。因為其他類型顯微鏡照明用的紫外光會引起植
物細胞受到一定程度的光損傷,所以多光子顯微技術對于植物表面上具
有紫外吸收能力的熒光發色團標記的細菌細胞的顯微成像非常有用。
這為微生態研究人員提供更多的可用熒光發色團,來研究在植物環境中
細菌的行為。但是有證據表明,實際上聚焦體積內的光漂白效應比單光
子激發更嚴重,特別是對于薄的樣品)。甚至對于綠色熒光蛋白(GFP)這
種被認為是相對穩定的熒光分子也是如此。但是,更進一步限制該技術
在植物微生物學中應用的事實也許是,多光子顯微技術本身的分辨率始
終比單光子顯微鏡技術(如CLSM)低。盡管如此,多光子顯微技術大大改
善了植物組織的三維成像效果,但實際上該技術僅適用于尺寸較大的微
生物的成像,而不適用于細菌。據我們所知,目前多光子顯微技術主要
應用于微生物學生物膜的研究上66。隨著價格低廉的多光子顯微
