光學顯微鏡的放大倍率的計算是目鏡的放大倍率乘上物鏡的放大倍率，若是使用立體顯微鏡，則還需再乘上鏡身倍率，一般情況來說，放大總倍率較大可達1500倍，而物鏡倍率較大則可達150倍，一些進階品質的光學顯微鏡的放大倍率當然不只如此，但價格上的考量可能是各實驗室需要考量的一個重要因素使得我們平常接觸到的光學顯微鏡的極限并沒有達到極致。
盡管物鏡開口值決定了系統的解析度，明亮度等光學顯微鏡的重要參數，且通常越高倍率的物鏡也擁有較高的開口值，似乎高倍率的物鏡鏡頭便可讓觀察者觀察到更微小的細節，但大倍率底下也意味著觀察視野變小，集光力降低，讓觀察區域更顯昏暗，此時即使物體的鑑別力提高了，但是想要看的細節卻沒辦法凸顯出來，此外承載儀器的基座的避震性要做得更好，否則微小的震動就會影響了觀測品質，因此在利用光學顯微鏡做基本的觀察時，并不是說越高倍率就越好，而是選擇在適當的倍率底下做較佳化的觀察，如果要做更高倍率的觀察，則需利用電子顯微鏡才是較正確的方式。
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